Объявление

Свернуть
Пока нет объявлений.

как приклеить срез гловного мозга крысы

Свернуть
X
  • Фильтр
  • Время
  • Показать
Очистить всё
новые сообщения

  • как приклеить срез гловного мозга крысы

    Может кто подскажет как приклеить срез головного мозга крысенка на предметное стекло.Толщина среза 350 микро.Пробовала предметные стекла покрывать желатином, белком с глицерином, Poly-L-Lysin по различным методикам- почти всегда отклеиваются, а мне их дегидрировать как-то надо.
    Последний раз редактировалось lenka; 21.02.2005, 05:45 PM.

  • #2
    Re: как приклеить срез гловного мозга крысы

    а срезы свежие или после заморозки? нарезанные в криостате срезы например очень хорошо держатся на специальных стеклах SuperFrost Plus (menzel-glaser, germany) никакого белка не надо.

    Комментарий


    • #3
      Re: как приклеить срез гловного мозга крысы

      А сушите их после приклеивания сколько? Тонким срезам достаточно ночи при комнатной температуре или 2 часа при 37 градусах. Для ваших толстых нужно будет больше времени.

      Комментарий


      • #4
        Re: как приклеить срез гловного мозга крысы

        Сообщение от nissim
        а срезы свежие или после заморозки? нарезанные в криостате срезы например очень хорошо держатся на специальных стеклах SuperFrost Plus (menzel-glaser, germany) никакого белка не надо.

        Срезы свежие
        Пробовала заморозить срез, потом на криостате на 50 микро нарезать, эти не отклеиваются, но для последующий реконструкции нейрона не годятся.

        Я не специалист.Но что есть криостаты, на которых срезы 350 микро нарезать можно? Я думала , что максимально 100 микро.

        Комментарий


        • #5
          Re: как приклеить срез гловного мозга крысы

          Сообщение от Cocooneuse
          А сушите их после приклеивания сколько? Тонким срезам достаточно ночи при комнатной температуре или 2 часа при 37 градусах. Для ваших толстых нужно будет больше времени.
          15 минут, потом сразу в алкогольную батарею. Со 100 микрометрными все прекрасно функционирует. Shrink минимально.
          Если срез в 350 микро на всю ночь оставить... Боюсь он так "усохнет" , да и микротрещин не избежать, я думаю.Мне морфология нейрона нужна как можно ближе к реальной.Хотя можно попробовать.

          Комментарий


          • #6
            Re: как приклеить срез гловного мозга крысы

            ИМХО, заморозка может не меньше попортить структуру ткани, чем сушка. На вибратоме режете?

            Комментарий


            • #7
              Re: как приклеить срез гловного мозга крысы

              Сообщение от Cocooneuse
              ИМХО, заморозка может не меньше попортить структуру ткани, чем сушка. На вибратоме режете?
              на нем

              сейчас иду приклеивать свои "шницеля", оставлю на ночь при комнатной тем.-ре....

              Комментарий


              • #8
                Re: как приклеить срез гловного мозга крысы

                Подумалось вот - а если его суперглю приклеить? Тогда срезы практически сушить не придется, да и держаться будет лучше. На мозги он повлиять не должен (ну только на поверхностный слой), с ним можно даже живые срезы на вибратоме резать. Не знаю вот только, как он на провОдки отреагирует.

                Комментарий


                • #9
                  Re: как приклеить срез гловного мозга крысы

                  Я уже такое делала ( правда не с суперглю, а моментом). Все замечательно, но после алкогольной батареи клей становится матовым.

                  Я думаю надо искать не как срезы приклеить, а как ткань более прозрачной сделать.

                  Кто-нибудь инкубировал срезы после окраски с DAB диметилсульфоксидом (DMSO)?

                  Комментарий


                  • #10
                    Re: как приклеить срез гловного мозга крысы

                    А если их не клеить вовсе? Обезвоживать в "плавающем" виде, а потом заливать какой-нибудь монтажной средой и прижимать покровным стеклом. Края стекла заливать парафином, например.
                    Как сделать Ваш "шницель" прозрачнее, не знаю :(. Что в литературе по этому поводу говорят?

                    Комментарий


                    • #11
                      Re: как приклеить срез головного мозга крысы

                      по поводу обезвоживания в плавающем виде- срезы "съеживаются" так, что обрисовывать уже нечего.

                      Я их на данный момент после окраски DAB сразу под мовиол и если что видно - рисую.Вообще-то в большенстве случаев неплохо получается, но хочется же лучше... А для этого нужно ткань как-то прозрачнее сделать, я думаю.
                      Для дегидрированных метилбензоат просто замечательно.
                      Для недегидрированных вроде DMSO говорят, 2 раза сделала - особых изменений в прозрачности не нахожу.
                      Последний раз редактировалось lenka; 21.02.2005, 05:46 PM.

                      Комментарий


                      • #12
                        Re: как приклеить срез гловного мозга крысы

                        А если яичным белком? Отделяете белок от желтка, намазываете тонким слоем на стекло и срез ложите, подсушиваете. У нас все ОК было :-)

                        Комментарий


                        • #13
                          Re: как приклеить срез гловного мозга крысы

                          Сообщение от Nuken
                          А если яичным белком? Отделяете белок от желтка, намазываете тонким слоем на стекло и срез ложите, подсушиваете. У нас все ОК было :-)
                          а сам срез при этом не сохнет?

                          Комментарий


                          • #14
                            Re: как приклеить срез гловного мозга крысы

                            Я, наверное, некорректно выразился. Имелось в виду просто ждете некоторое время. Можно препарат накрыть чем-нить и создать влажную камеру. Белок быстро схватывает срез и прикрепляет его к стеклу. Время ожидания подобрать опытным путем, у нас срезы были тоньше. Мы так клеили срезы щитовидной железы для постоянных препаратов.

                            Комментарий


                            • #15
                              Re: как приклеить срез гловного мозга крысы

                              Сообщение от Nuken
                              Я, наверное, некорректно выразился. Имелось в виду просто ждете некоторое время. Можно препарат накрыть чем-нить и создать влажную камеру. Белок быстро схватывает срез и прикрепляет его к стеклу. Время ожидания подобрать опытным путем, у нас срезы были тоньше. Мы так клеили срезы щитовидной железы для постоянных препаратов.
                              ясно... спасибо!

                              возможно, имеет смысл попробовать (всё лучше, чем клей)... вот только, мне всё же кажется, что нейроны таки успеют сдохнуть, пока схватывается

                              P.S. хотя, стоп - я не в ту сторону думаю... для того, о чём спрашивала lenka, метод как раз может подойти... но она уже белком пробовала, если не ошибаюсь
                              Последний раз редактировалось Ratte; 16.09.2005, 03:49 PM.

                              Комментарий

                              Обработка...
                              X
                              yobit wp super cache yobit.net официальный сайт yobit.net freewallet bgogo